肌钙蛋白I的生化特性及其影响测定的身分

上海医科大学中山病院 潘柏申 

  跟着研讨和运用的生长,心肌肌钙蛋白(cTn)[包孕心肌肌钙蛋白I(cTnI)和心肌肌钙蛋白T(cTnT)]已成为临床诊断心肌毁伤确实定标记物。因为仅一家消费厂商具有cTnT消费专利,因而人们对cTnI的消费运用乐趣大增。现在FDA最少已核准8家消费厂商的共16种cTnI检测试剂。正在临床运用中发明,这些cTnI检测试剂的测定值之间存在着差别,差别的cTnI 剖析要领对同一份标本的检测值最大可相差30余倍,那使得种种要领的参考局限、剖析滋扰、剖析变异、诊断窗口期和诊断和预后的临界值等泛起差别水平的差异,给临床运用和评价带来肯定困扰。相识cTn特别是cTnI的系列化稀奇和种种剖析测定试剂的特性,将有助于临床上准确运用这些要领检测和评价心肌缺血毁伤。

    一、心肌肌钙蛋白细胞内构造和散布

    1.1 心肌肌钙蛋白构造构造 cTn由三种亚基构成,到场调治肌肉膨胀运动。其中的肌钙蛋白C(TnC)是Ca2+联合亚基,分子量18kDa,等电点4.1;cTnI为抑止亚基,分子量23kDa,等电点9.87;cTnT为本肌球蛋白联合亚基,分子量34kDa,等电点5.1。

    正在Ca2+存在的状况下,TnC取Ca2+联合后构型发作转变,取cTnI的联合加强(Ka 约为1.5×10-8 M-1);TnT取TnC – cTnI联合,但较TnC – cTnI之间的联合强。反之,Ca2+浓度低或TnC已取Ca2+联合时,TnC和cTnI之间的联合对照松懈。cTnI-cTnT的联合相对较强( Ka 约为1.5×10-5 M-1) 。

    1.2 心肌肌钙蛋白的构造含量 正在心肌内cTnI的含量约莫为5mg/g干重构造,cTnT的含量大抵为10.8mg/g干重构造(相比之下,CK-MB仅1.4mg/g干重构造;cTn重要联合于心肌肌纤维中,少许(cTnI的2.8% ~ 4.1%;cTnT的6% ~ 8%)正在细胞浆中以游离情势存在。那取心肌细胞缺血毁伤后的开释体式格局亲切有关。

    1.3 开释情势 心肌细胞毁伤后,游离cTnT较早开释构成第一个峰,随后联合于肌纤维中的cTnT逐步开释而泛起第二个峰;因为细胞液中的含量较少,cTnI开释一般只要一个峰。cTn一样平常正在心肌毁伤后5 ~ 8h外周血中泛起增高,最高值正在12 ~ 24h,增高可持续7 ~ 10天(cTnI)或10 ~ 14天(cTnT)。

    1.4 外周血中存在情势 外周血中的cTn终究是以复合物照样游离情势存在,曾有过很多效果差别的研讨报导。如今多以为,cTn开释重要是以TnC﹣cTnI﹣cTnT复合物情势,随后降解。外周血中的cTnI既有游离情势,又有差别复合物的情势(cTnI﹣TnC、cTnI﹣cTnT和cTnT﹣cTnI﹣TnC)。正在AMI病人中以cTnI﹣TnC复合物情势居多数(90%以上),cTnI﹣cTnT复合物仅正在不到50%病人的血中被发明,并且其中的cTnI仅占部cTnI的5%以下,因而检测重要性远不如cTnI﹣TnC复合物;其他情势的cTnI较少;cTnT游离情势较多见。

    1.5 抗体辨认位点(抗原决意簇) 差别亚基复合物的情势使得一种抗cTnI的抗体不克不及辨认另外一构造情势cTnI的抗原决意簇。有的单克隆cTnI的抗体辨认游离情势cTnI的才能较强;有些则重要以辨认TnC﹣cTnI复合物情势为主。那使得接纳差别抗体的种种试剂检测统一标本时泛起检测效果差别的征象。

    二、心肌肌钙蛋白I的构造稳定性

    体外实行研讨生长,AMI的心肌坏死组织培养3h后,cTnI的蛋白质一级构造、二级构造和三级构造皆泛起了水平不等的转变。

    2.1 卵白水解酶感化 研讨发明,AMI后若血运未从新竖立,心肌细胞正在30~60min内坏死,坏死细胞的溶酶体可开释多种卵白水解酶。cTnI较不稳定,易受卵白水解酶感化,正在体外实行中发明敏捷降解,但其差别局部受影响的水平有差异。cTnI的中央地区(第28位和第110位氨基酸)稳固死显着较下(能够是受TnC的珍爱感化);氨基病和羧基端则对卵白水解酶感化敏感。氨基端水解后降解构成-14kDa的片断;羧基端则降解构成-18kDa的片断。因而,欲进步检测敏感性和可重复性,抗体的辨认位点最好位于cTnI的中央地区。

    2.2 蛋白激酶A磷酸化 cTnI的第22位和第23位的丝氨酸易受蛋白激酶A感化发作磷酸化回响反映,使cTnI构成四种情势:一种已磷酸化、两种单磷酸化和一种单磷酸化构造。研讨发明,病人体内磷酸化情势的cTnI占相称数目。磷酸化可改动cTnI的分子结构情势和抗原性,从而影响某些抗体的辨认。

    2.3 氧化复原情势 cTnI的第79位和第96位是半胱氨酸,轻易发作氧化或复原回响反映。这类氧化或复原回响反映了可影响cTnI的分子结构情势和抗原性,从而影响某些抗体的辨认才能。

    三、测定校准品

    各消费厂商的cTnI校准品内含的cTnI构造情势或含量各不雷同,使得测定效果天差地别。以至运用同一份标定cTnI值的人血清停止校准也未能完整消弭差别测定体系之间测定值的差别。因而,有人发起最好接纳从民气构造提取的cTnI﹣cTnT﹣CTnC复合物作为校准品。

    四、抗凝剂

  为收缩检测周转工夫(TAT),很多检测要领要求接纳血浆或齐血,以制止星散血清所需的工夫。那需求公道挑选恰当的抗凝物。

    4.1 EDTA EDTA是Ca2+螯合剂,可促使cTnI﹣TnC复合物的解离,使游离型cTnI增添,从而影响测定值的真实性。因而,有些专家以为最好制止运用。

    4.2 肝素 cTnI带有较多正电荷(pI 9.87),易于和带有负电荷的基团构成复合物。肝素带有负电荷,取cTnI联合构成的复合物可影响抗原一抗体回响反映,进而引发cTnI检测值低落。但正在差别的cTnI检测试剂中,肝素的滋扰水平不等。

    为使cTnI的测定越发正确,以便为临床供应越发科学、牢靠的信息,很多临床化学家停止了大量的深切研讨讨论,并号令展开cTnI测定标准化事情。为了使cTnI测定标准化顺利进行,IFCC和AACC借离别竖立了专门机构处置那方面事情 友情链接:                    。必需认识到,cTnI的测定标准化事情将是十分艰巨的。